安捷倫氣相色譜儀研究大黃魚中多種殘留農(nóng)藥
1試驗部分
1.1 儀器與試劑
Agilent-7890B氣相色譜儀（美國Agilent 公司），配有電子捕獲檢測器（μECD）和火焰光度檢測器（FPD）； 色譜柱：D B-17M S 毛細(xì)管柱，30m ×250μm ×0.25μm（美國J& W 公司）；離心機；旋渦混合器（德國IK A 公司）；恒溫氣浴振蕩搖床（德國IK A 公司）；固相萃取裝置（美國SU PELCO 公司）；氮吹濃縮儀；ENVI-18 固相萃取小柱（美國SU PELCO公司）。
標(biāo)準(zhǔn)溶液：由中國農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所研制（濃度均為l00 μg/m L）；所用溶劑中除乙酸乙酯、正己烷為色譜純外，其余為分析純，其中中性氧化鋁填料于使用前400℃烘烤2 h，降溫后備用，無水疏酸鈉于使用前需650℃烘烤4 h，降溫后保存在干燥器內(nèi)備用；水為三重過濾去離子水。
1.2 實驗方法
1.2.1 提取方法。
稱取10 g 試樣置于50 m L 離心管中，加入4 m L 水，加入4 g 氯化鈉，接著加入8 m L乙腈溶液，旋渦混合１m in，放在恒溫氣浴振蕩搖床上振蕩15 m in，4500 r/m in 離心5 m in，上清液按1.2.2 方法進(jìn)行凈化，殘渣中再加入5 m L 乙腈溶液提取一次，上清液也按1.2.2 方法進(jìn)行凈化。
1.2.2 凈化方法。
在EN V I-18 固相萃取柱上端依次填入約5 m m 高的中性氧化鋁填料，再填入約5 m m高的無水硫酸鈉，用4 m L 乙腈預(yù)淋洗柱子，棄去流出液，然后將上述1.2.1 的上清液慢慢轉(zhuǎn)移至柱中，收集全部流出液于15 m L 離心管中，于40℃下氮吹至近干，zui后準(zhǔn)確移取1 m L 乙酸乙酯－正己烷（體積比1:1，色譜純）定容洗脫，過膜，裝入進(jìn)樣瓶，分別供G C-μECD 和G C-FPD 分析。
1.2.3 儀器參數(shù)與測定條件
1.2.3.1 有機磷類農(nóng)藥（以下簡稱第Ⅰ組），用G C-FPD 來測定。色譜柱：D B-17M S 石英毛細(xì)管柱，30 m×250μm×0.25μm ；柱升溫程序：100 ℃保持1 m in，以10 ℃/m in 升至120 ℃，再以15 ℃/m in 升至190 ℃，然后以6℃/m in 升至230 ℃，zui后以30℃/m in 升至290 ℃保持7 m in；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測器（FPD）溫度：240 ℃；氫氣：75 m L/m in；空氣：100 m L/m in；載氣：氮氣，純度大于等于99.99% ，流量50 m L/m in；進(jìn)樣量：2 μL。在上述色譜條件下農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、大黃魚樣品以及樣品添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜見圖1。
1.2.3.2 有機氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥（以下簡稱第Ⅱ組），用G C-μECD 來測定。色譜柱：D B-17M S 石英毛細(xì)管柱，30 m×250 μm ×0.25 μm ；柱升溫程序：80 ℃保持1 m in，以20 ℃/m in 升至240 ℃保持3 m in，再以10 ℃/m in 升至260 ℃保持4 m in，zui后以10 ℃/m in 升至290 ℃保持9 m in；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測器（μECD）溫度：310 ℃；載氣：氮氣，純度大于等于99.99% ，流量50 m L/m in；進(jìn)樣量：2μL。在上述色譜條件下農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、大黃魚樣品以及樣品添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜見圖2。
2 安捷倫氣相色譜儀研究大黃魚中多種殘留農(nóng)藥結(jié)果與分析
2.1 樣品前處理條件的選擇
2.1.1 提取。
對于動物源性食品中的農(nóng)藥殘留，一般認(rèn)為用脂溶性溶劑將油脂一起提取出來，提取效率比較高，但該方法會同時帶出大量雜質(zhì)，給凈化帶來困難。乙腈作為一種通用的提取溶劑在藥物殘留檢測方面得到了廣泛的運用，乙腈對大多數(shù)農(nóng)藥均有較好的溶解度且脂肪在乙腈中的溶解度較小，而且乙腈與凈化時的固相萃取柱相相匹配，無需濃縮可直接過柱，因此本研究考慮使用乙腈作為提取溶劑。但由于單純使用乙腈提取時，魚肉會凝結(jié)在一起不利于有機溶劑在水產(chǎn)品組織中的滲透提取。實驗發(fā)現(xiàn)加入4 m L 水，可以增加乙腈對肌肉的滲透性，魚肉組織得到*分散，有利于提高提取效率，而同時加入氯化鈉使蛋白質(zhì)與氯化鈉相互作用，從而肌肉組織呈稀泥狀，整個提取體系狀態(tài)非常均一，利用氯化鈉的鹽析作用，高速離心使水相和有機相分離，以除去水和水溶性雜質(zhì)，同時還可減少提取液中的干擾基質(zhì)含量并提高待測物在乙腈相中的分配比。離心后的溶液偶有乳化現(xiàn)象，可振搖幾下再離心，即可消除乳化。
2.1.2 凈化。
Envi-18 柱的硅膠上接有十八烷基，有較高的相覆蓋率和碳含量，對非極性物質(zhì)有較高的容量，Envi-18 柱配合乙腈作為正相柱使用，同時結(jié)合中性氧化鋁一起作用，對油脂的去除有十分顯著的效果，同時還可以除去大部分弱極性的雜質(zhì)。在柱上裝入無水硫酸鈉，預(yù)先除去提取液中殘余的極少量水分。提取液過柱后呈無色透明，凈化效果良好，且對多種有機氯、擬除蟲菊酯、有機磷三種不同類型的農(nóng)藥均有滿意的回收率。而且本方法的提取液不必濃縮，可直接過柱，操作簡便。
2.2 方法的線性范圍、定量下限、回收率和精密度
根據(jù)14 種農(nóng)藥在氣相色譜儀中的響應(yīng)值和各進(jìn)出口國*，確定各種農(nóng)藥在混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液中的濃度，其中α- 硫丹、β- 硫丹、硫丹硫酸鹽0.005 μg/m L，其余11 種農(nóng)藥均為0.05 μg/m L。再由混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋成5 個不同濃度的混合標(biāo)樣，用氣相色譜進(jìn)行分析，以峰面積對質(zhì)量濃度做線性回歸分析，線性方程和相關(guān)系數(shù)見表1 和表2。用本方法對大黃魚添加水平為0.001~0.01 m g/kg 的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行平行6 次實驗，其中α 硫丹、β 硫丹、硫丹硫酸鹽的定量下限（S/N≥10）為0.001 m g/kg，其余各項目的定量下限均小于0.01 m g/kg。方法平均回收率為63% ～110% ，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.1% ～10.5% ，結(jié)果較為理想。
3安捷倫氣相色譜儀研究大黃魚中多種殘留農(nóng)藥結(jié)論
本文以脂肪含量較高的大黃魚為研究對象，建立了用一種前處理方法同時檢測大黃魚中多種有機氯、擬除蟲菊酯和有機磷類農(nóng)藥殘留量的分析方法。該方法的步驟簡單、試劑用量少、效果良好，方法回收率及精密度均符合殘留分析要求，適合于監(jiān)控大黃魚中的多種農(nóng)藥殘留。通過喂養(yǎng)的方式給藥，分析農(nóng)藥在魚體內(nèi)代謝和殘留情況，這有待于今后進(jìn)一步實驗研究。
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