化妝品中的紫外線吸收劑除能防止皮膚曬黑或曬焦以外，還要求對皮膚無毒、無害，同其他妝化品原料的相溶性能好，而且還必須揮發性低而穩定性強。
在防曬化妝品中紫外線吸收劑的使用量，一般則在0.1～10%之間。加入量過多，有時會使皮膚發生過敏反應。紫外線吸收劑的使用量，大多是通過實際日曬試驗得出的。另外，其使用量也因化合物吸收能的不同而有所不同，不能一概而論。
本文采用常規液相色譜分析化妝品中17種紫外線吸收劑,為化妝品的質量監管提供了適用性更強的方法。
1 實驗部分
1.1 儀器、試劑與材料
安捷倫液相色譜儀 Agilent 1200
甲醇:色譜純、分析純。氨水:分析純。甲酸:色譜純。四氫呋喃:分析純。色譜柱:Phenomenex PFP(250 mm×4.6 mm, 5 μ m)。標準物質:苯基苯并咪唑磺酸(PBSA)、二苯酮、二苯酮-3(Bp3)、p-甲 氧基肉桂酸異戊酯(IAMC),對氨基苯甲酸(PABA)、4-甲基芐亞基樟腦(4MBC),二苯酮-4 和二苯酮-5(Bp4/Bp5)、對氨基苯甲酸乙基己酯(OD-PABA)、水楊酸乙基己酯(EHS)、胡莫柳酯(HMS),奧克利林 (OC)、二乙氨基羥苯甲酰基苯甲酸己酯(DHHB)、甲氧基肉桂酸乙基己酯(EHMC)、丁基甲氧基二苯酰基甲烷(BMDBM)、乙基己基三嗪酮 (EHT)、亞甲基雙-苯并三唑基四甲基丁基酚(MBBT)、雙-乙基己氧苯酚甲氧苯基三嗪(BEMT).標準物質純度均大于95% 。
1.2 標準溶液的配制
分別準確稱取各標準物質100 mg(均至0.1 mg)于棕色容量瓶中,苯基苯并咪唑磺酸用1%氨水氨化甲醇溶解并定容至10 mL,其他均用四氫呋喃溶解定容至10 mL,配制成10 g/L 的標準儲備液,于冷藏條件(4 ℃)下保存,備用。分別準確移取標準儲備液各100 μ L,用甲醇定容至10 mL,配成100 mg/L 的混合標準溶液,再用甲醇逐級稀釋配成50、20、10、5、1 mg/L 的系列混合標準溶液。
1.3 樣品前處理
稱取約0.1 g化妝品樣品(至0.001 g)于15 mL具塞離心管中。
1.3.1對膏霜、乳液等水易分散的化妝品,先向離心管中加入1 mL水,渦旋或超聲使其均勻分散后,再向離心管中加入9 mL四氫呋喃/甲醇(體積比2 ∶ 1,含0.1%的氨水)使總體積定容至10 mL,渦旋1～2 min,超聲15 min。取2 mL于 5000 r/min 離心5～10 min,上清液用0.2 μ m聚丙烯微孔濾膜過濾,待用。
1.3.2對唇膏、指甲油類等水無法分散的化妝品,先向離心管中加入6 mL四氫呋喃(含0.1%的氨水),渦旋或超聲使樣品*分散。若不能分散，一般適當超聲可解決問題；對超聲15 min仍無法分散的樣品,需在60 ℃水浴中振蕩加熱約1～2 min即可溶解分散。繼續向離心管中加入4 mL甲醇/水(體積比3 ∶ 1,含0.1%的氨水)使總體積定容至10 mL,渦旋混合。取2 mL于 5000 r/min 離心5～10 min,上清液用0.2 μ m聚丙烯微孔濾膜過濾,待用。
1.3.3涉及對氨基苯甲酸、苯基苯并咪唑磺酸的檢測,需取上述待用上清液100 μ L用甲醇稀釋至1 mL后,再上機測試。其他目標化合物的檢測視情況可適當稀釋后上機測試,也可無需稀釋,將上述待用上清液直接上機測試。
1.4 液相色譜條件
色譜柱:Phenomenex PFP(250 mm×4.6 mm, 5 μ m);柱溫:25 ℃;流動相:A相為水溶液(含0.1%的甲酸), B相為含20%異丙醇的甲醇溶液(含0.1%的甲酸);梯度洗脫條件:0～2.0 min, 32%B; 2.0~2.1 min, 32%B~70%B; 2.1～5.0 min,由70%B線性增加為85%B; 5.0～15.0 min,由85%B線性增加為90%B; 15.0~15.1 min, 90%B~100%B;15.1～25.0 min,保持B相比例為100% ; 25.1～30.0 min,由100%B線性降至32%B。流速:1.2 mL/min;檢測波長:311 nm和280 nm。進樣量:10 μ L。
2 結果與討論
2.1 樣品前處理條件的優化
溶劑體系中四氫呋喃、甲醇、水的zui終比例為6 ∶ 3 ∶ 1。為保證不同化妝品樣品的分散性,在溶劑的加入順序上稍作調整。對膏霜、乳液等水易分散化妝品,先用1 mL水分散,再加入9 mL四氫呋喃/甲醇(體積比2 ∶ 1)定容;對唇膏、指甲油類等水無法分散的化妝品,先用6 mL四氫呋喃分散,再加入4 mL 75%甲醇水溶液定容。對氨基苯甲酸和苯基苯并咪唑磺酸的檢測, 必須將提取液用甲醇稀釋10倍后再進樣分析，其他目標化合物的分離不受氨水影響,可在過濾后直接進樣分析;但是鑒于液相色譜對此類紫外吸收劑的檢測靈敏度也較高,因此為減少對色譜柱的污染,建議稀釋10倍后再進行進樣分析。
2.2 液相色譜條件的優化
2.2.1 色譜柱的選擇
考慮到紫外線吸收劑均為帶有苯基的化合物,測試了對苯基化合物有特異性選擇的Phenomenex PFP色譜柱,該色譜柱對17種目標物顯示了的分 離能力,在優化的色譜條件下,17種目標物可獲得*的基線分離(見圖1)。為此,本文zui終選擇Phenomenex PFP作為分析用色譜柱。
2.2.2 流動相的選擇
(1)用含20%異丙醇的甲醇溶液作為強洗脫溶劑,采用梯度洗脫條件進行17種目標物的色譜分離。
(2)在流動相中添加0.1%甲酸以獲得*的色譜分離。
2.3 紫外檢測波長的優化
同時采集280 nm和311 nm兩個波長下的液相色譜分離圖譜,二苯酮和丁基甲氧基二苯酰基甲烷用280 nm波長下的紫外吸收進行定量計算,其他15種目標物用311 nm波長下的紫外吸收進行定量計算。
2.4 線性范圍
在設定的分析條件下,測定系列濃度的標準溶液,以目標物的質量濃度x(mg/L)為橫坐標、色譜峰的峰面積y為縱坐標進行線性回歸,得到的線性方程、相關系數(r)和線性范圍見表1。結果表明,所有目標物在設定的濃度范圍內,其濃度與色譜峰面積均呈線性關系,且線性相關系數均大于0.999。
2.5 回收率和精密度
向不含目標物的乳液、指甲油和唇膏基質中定量添加目標化合物的標準溶液,使基質中目標物的zui終含量為1、10和20 mg/g,每個含量水平做6個平行樣,按方法進行樣品處理后測定,計算目標物的回收率。同時,根據6次平行試驗的結果,計算出相對標準偏差(RSD),結 果見表2。
2.6 方法檢出限和定量限
以色譜峰信噪比≥3時的目標物的濃度確定為檢出 限,10倍信噪比時目標物的濃度確定為定量限。由此確定方法的檢出限為:PABA 200 μ g/g;PBSA、DHHB和HMS 100 μ g/g;其他目標物均為30 μ g/g。方法的定量限為:PABA 600 μ g/g;PBSA、DHHB和HMS 300 μ g/g;其他目標物均為100 μ g/g。
3 結論
回收率試驗及實際陽性樣品測試實驗均表明本方法用于化妝品中17種紫外線吸收劑的測定,結果準確、可靠。
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